米非司酮对人绒毛膜癌细胞株体外作用的观察
孙丽君 郑英 王春萍 崔金全 陶银贵 谭丽 廖予妹
【摘要】 目的 探讨米非司酮对人绒毛膜癌细胞株JAR的作用。方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法，观察1、5、10、20μmol/L的米非司酮对JAR细胞的杀伤活性，通过免疫组化及酶联免疫法（ELISA）检测用药后，JAR细胞核增殖抗原Ki-67的表达及hCG分泌的变化。结果 4种浓度的米非司酮对JAR细胞均有杀伤作用，并呈剂量依赖性，以20 μmol/L浓度的米非司酮作用最强，杀伤率达73.19%。5 μmol/L的米非司酮与JAR细胞作用72小时，Ki-67抗原阳性率明显下降，第3天hCG分泌量明显下降。结论 米非司酮对JAR细胞具有细胞增殖抑制及细胞毒作用，并可抑制其hCG的分泌。
【关键词】 米非司酮 绒毛膜癌 Ki-67抗原
Effects of Mifepristone on Choriocarcinoma Cell Line JAR in vitro
SUN Lijun, ZHENG Ying, WANG Chunping, et al.
The Second Affiliated Hospital, Henan Medical University, Zhengzhou 450003
【Abstract】 Objective To investigate the effects of mifepristone on cell proliferation and hCG secretion of human choriocarcinoma cell line JAR and the cytotoxic effects of mifepristone on this cell line. Methods The cytotoxic effects of four different concentration of mifeprstone (1、5、10、20 μmol/L) were assessed with methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) colorimetric assay. The expression of nuclear proliferative antigen Ki-67 and the amount of hCG secreation in JAR cells were detected with avidin-biotin complex method, immuno-histochemical method and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) respectively. Results There were dose-dependent cytotoxic effects on JAR cells in four different concentrations of mifepristone. This effect plateaued at 20 μmol/L. When the JAR cells were exposed to 5 μmol/L mifepristone for 72h, the expression of Ki-67 antigen was declined and the amount of hCG secretion was decreased significantly at the third day.Conclusion In vitro, mifepristone has cytostatic and cytotoxic effects on JAR cell line and may inhibit the secretion of hCG in JAR cells.
【Key words】 Mifepristone Choriocarcinoma Ki-67 antigen
近年来，国外一些学者发现，孕激素受体拮抗剂——米非司酮对某些孕激素受体阳性的肿瘤有一定抑制作用。许多体内外试验证实，米非司酮对人乳腺癌［1］、脑膜瘤［2］、子宫肌瘤［3］等均有明显的抑制作用。有关米非司酮对绒毛膜癌的作用未见报道。本研究将米非司酮直接作用于人绒毛膜癌细胞株JAR，观察米非司酮对JAR细胞的杀伤活性及其对该细胞增殖和hCG分泌的影响。
材料与方法
一、材料
1.瘤细胞：细胞株JAR，为人胎盘绒毛膜癌细胞株，由中国科学院上海细胞生物学研究所提供。
2.药物与试剂来源：四甲基偶氮唑蓝(MTT)购于美国Sigma公司；兔抗人Ki-67抗体由美国Zymed公司提供；卵白素生物素复合物法（ABC）抗兔IgG免疫组化试剂盒，购于北京华美公司；β-hCG酶联免疫试剂盒，由美国Maxim公司提供；米非司酮由上海华联制药厂提供。
二、方法
1.细胞培养：将JAR细胞培养于含10%胎牛血清的PRMI-1640培养液内，0.25%胰酶消化传代。
2.MTT比色法测定：取对数生长期JAR细胞，以1×105个/ml，每孔100 μl，接种于96孔培养板中，于37℃、5%二氧化碳恒温培养箱内培养，24小时后换入分别含有1、5、10、20 μmol/L的米非司酮培养液(实验组)；另设对照组，培养液中含0.2%(V/V)乙醇，置培养箱内继续培养。隔日更换1次同种新鲜培养液，显微镜每天观察细胞生长形态。加入米非司酮5天后，参照温汉平等［4］的方法，经酶标仪以570nm的波长测定各孔吸光度（A）值，同法重复做3个培养板。
3.检测JAR细胞Ki-67抗原的表