1.3 HCG单克隆酶免定量检测 采用HCG单克隆酶免定量方法:（1）DMEM培养液调整细胞浓度为1×10 5 /ml，接种于96孔培养板，设3复孔。（2）选择对数生长细胞，24h后弃上清，实验组细胞加人200μl不同浓度马鞭草C部位（10g/L、20g/L、40g/L），对照组加等量培养液。（3）设3个时间段（24h、48h、72h），设定时间段收集上清，-20℃冻存待测HCG。（4）HCG标准品用培养液稀释成500IU/L、400IU/L、200IU/L、100IU/L、50IU/L5个浓度，用HCG酶标单克隆抗体试剂盒检测每个浓度的OD值（波长450nm），以HCG浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线。（5）待测液用上述方法测定OD值，根据标准曲线计算样品中HCG浓度。每组实验至少重复3次。（6）HCG分泌抑制率=（对照组OD值-实验组OD值）/对照组OD值×100%。以作用时间为横坐标，抑制率为纵坐标绘制抑制率曲线图。
1.4 透射电镜观察细胞超微结构变化 （1）用细胞刮棒收集实验及对照组细胞各约1×10 7 /ml;（2）2.5%戊二醛4℃前固定2h，PBS漂洗15min×4遍;（3）1%的锇酸4℃后固定2h，0.1MPBS洗1遍，蒸馏水洗1遍;（4）2%醋酸铀染色2h，室温放置;（5）50%、70%、90%、100%、100%丙酮室温下逐级脱水，各15min;（6）浸渍与包埋:丙酮与包埋剂1:1室温1.5h、丙酮与包埋剂1:2室温过夜及纯包埋剂37℃浸渍3h后用纯包埋剂包埋;（7）60℃聚合36h;（8）LKB-V超薄切片机切片（50～100nm），柠檬酸铅染色，透射电镜观察。
1.5 统计学方法 用SPSS10.0进行统计学处理，各组之间比较用方差分析，P<0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 MTT法对细胞增殖抑制率的影响 马鞭草C部位呈剂量和时间依赖抑制体外培养的JAR细胞生长，随着时间与剂量的增加，增殖抑制率逐渐增高，总体方差分析结果显示不同时段各剂量组之间差异有显著性;与对照组比较，除低剂量组外，其余差异皆有显著性;组间比较，除24h低剂量组与中剂量之间，其余差异皆有显著性。以C部位40g/L组72h抑制作用最强，见表1。MTT显色法以作用时间为横坐标，增殖抑制率为纵坐标绘出不同浓度药液在不同时间作用于JAR细胞的相对生长曲线，见图1。
2.2 马鞭草C部位对人绒毛膜癌JAR细胞分泌HCG的影响 见图2，马鞭草C部位对人绒毛膜癌JAR细胞分泌HCG有明显的抑制作用，以40g/L浓度抑制作用最明显，随着药物浓度与作用时间的延长，HCG的分泌逐渐下降，呈现时间和剂量依赖，见表2。
表1 马鞭草C部位对JAR细胞的生长抑制作用 （略）注:与对照组比较， * P<0.01;与低剂量组比较， ▲ P<0.01
表2 马鞭草C部位作用后JAR绒癌细胞HCG分泌量和抑制率 （略）注:与对照组比较， * P<0.05， ** P<0.01
图1 细胞增殖抑制率与作用时间关系
图2 HCG分泌抑制率与马鞭草C部位量效关系
2.3 加入马鞭草C部位后人绒毛膜癌JAR细胞的形态学变化 透射电镜观察结果显示，对照组细胞核大，圆形或椭圆形，形态较规则，染色质分布均匀，核膜完整，边缘光滑，核仁明显，见图3。40g/L药物作用24h后，可见JAR细胞微绒毛减少，细胞核染色质开始向边缘聚集，内质网扩张，见图4。作用48h，染色质边聚显著，核中央电子密度降低，形态不规则，见图5。作用72h，内质网极度扩张、核糖体减少、胞质呈空泡状改变并可见凋亡小体及膜结构髓样改变，见图6、图7。
3 讨论
肿瘤的发生发展与细胞增殖失控、分化障碍及凋亡受阻密切相关，而机体细胞的稳态依赖于细胞增殖、分化和凋亡之间的动态平衡。绒毛膜癌是来源于胎盘滋养细胞的肿瘤，其特点是增生的滋养细胞失去原来绒毛或葡萄胎的结构，大片侵入子宫基层及血管，并早期可发生全身转移，以致患者迅速死亡 ［5，6］ 。近年来，发现细胞凋亡在肿瘤发生机制上起重要作用，诱导凋亡已成为肿瘤治疗研究中的一项重要课题。研究发现，大多数化疗药物都具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用，但化疗药物的毒副作用限制了其临床应用，因而植物抗癌成分受到人们极大关注。马鞭草是一味普通的中草药，应用已有近千年的历史。本实验用MTT显色法，肯定了马鞭草C部位对体外培养的JAR细胞有明显的增殖抑制作用，并随剂量与时间的增加而不断增高，经统计学检验差异有显著性（见表1）;40g/L组在72h的增殖抑制率达到65%，提示大剂量马鞭草C部位药液可抑制人绒癌JAR细胞的生长。正常情况下，细胞增殖和凋亡维持了组织中细胞总数平衡。肿瘤组织因细胞过度增殖，凋亡相对抑制，从而造成机体的失衡状态，加速和促进肿瘤细胞凋亡对肿瘤防治具有重要意义。马鞭草对JAR细胞的这种抑制作用提示其可能诱导JAR细胞凋亡。本实验以绒毛膜癌JAR细胞为体外模型，还发现不同浓度马鞭草C部位对绒癌JAR细胞HCG分泌均产生抑制作用，呈时间及剂量依赖，以40g/L最为显著。HCG是由两种不同的分子组成的糖蛋白激素，它们不仅具有不同种类的肽，也具有不同的分子化合物和糖类。分