肝癌  胃癌  膀胱癌  食管癌  皮肤癌  纤维肉瘤  睾丸肿瘤  子宫颈癌  子宫内膜癌  脑垂体腺瘤
肾癌  喉癌  尿道癌  乳腺癌  淋巴瘤  甲状腺癌  绒毛膜癌  颞叶肿瘤  支气管腺瘤  神经胶质瘤
肺癌  脑瘤  白血病  外阴癌  结肠癌  黑色素瘤  前列腺癌  输卵管癌  尤文氏肉瘤  鳞状细胞癌
鼻咽癌  胰腺癌  大肠癌  直肠癌  卵巢癌  胆囊癌  艾滋病  软骨瘤  阴茎癌  血瘤  贲门癌  骨肉瘤

乙酰胆碱对三种人垂体腺瘤细胞增殖及凋亡的影响

弃8孔载玻片盒内的培养液, 分别加入含不同浓度的ACh(0.1、1 和10 μmol/L)、ACh(10 μmol/L)＋阿托品(10 μmol/L)、ACh (10 μmol/L)＋筒箭毒 (10 μmol/L) 和碳酰胆碱 (10 μmol/L) 的无血清DF-12培养液。 阴性对照组为含1 ml/L二甲基亚砜的50 g/L胎牛血清培养液。孵育48 h, 吸弃培养液, 40 g/L多聚甲醛固定25 min, 0.01 mol/L PBS洗5 min×3次。用TUNEL(Tdt-mediated dUTP nick end labeling)试剂盒的方法, 采用末端探针标记检测凋亡细胞。在每例每组(8孔板的1孔)中, 计数10个视野(20×物镜)中凋亡细胞的百分比作为凋亡指数(apoptosis index, AI)。

 1.9  实验分组及统计学分析    所有数据均以mean±SD表示, 两组间均数比较用t检验处理, 多组间均数采用Origin 5.0软件中单因素方差分析进行统计学处理。

 

2结果

2.1  胆碱乙酰转移酶在人正常垂体及人垂体腺瘤中的表达

ABC免疫组织化学法证实, 人正常垂体及人垂体无功能瘤、催乳素瘤和生长激素瘤等三种垂体腺瘤中均有胆碱乙酰转移酶的表达, 但表达ChAT 的阳性细胞数量明显不同。人三种垂体腺瘤表达ChAT 的阳性细胞数量较少, 散在分布, 但染色呈强阳性, 以DAB显色, 可见棕黄色颗粒分布于细胞浆中(图1A、B、C)。正常人垂体表达ChAT 的阳性细胞数量较多, 大部分细胞胞浆内可见棕黄色颗粒, 但强度较垂体腺瘤细胞弱。由于该例正常人垂体并非严格意义上的正常垂体, 因而部分细胞可见明显空泡化(图1D)。

2.2  ACh对人垂体腺瘤细胞凋亡的影响

凋亡细胞经TUNEL染色后表现为细胞核的棕黄色着色(图2A)。ACh虽然可抑制体外培养的人垂体腺瘤细胞的增殖代谢, 但TUNEL检测结果表明, ACh不能诱导体外培养的人垂体腺瘤细胞发生凋亡(图2B), 其凋亡指数与其他各组相比无明显差异(表1)。

 

表1. 体外培养的人垂体腺瘤细胞经不同处理后凋亡指数(AI)的变化

Table 1. Apoptotic index of human pituitary adenoma cells after different treatments (n=6)

  Group  〖〗   AI (%, mean±SD)  Negative control 〖〗     1.5±0.7    ACh0.1 μmol/L  〖〗  1.3±0.7      1 μmol/L  〖〗  1.1±0.4      10 μmol/L   〖〗  1.8±0.8     ACh+Atro (10 μmol/L)  〖〗   2.0±1.1ACh+Tubo (10 μmol/L)  〖〗 1.7±0.9Carbachol    (10 μmol/L)  〖〗   1.5±0.6

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