本实验还选用了两种方法来检测ACh对培养人垂体腺瘤细胞凋亡的影响: 流式细胞仪检测DNA含量的PI染色法和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位切口末端标记技术(terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) dUTP nick end labeling, TUNEL)。前者方法简便易行并可定量检测, 但其敏感性较差: 因为凋亡早期虽有DNA裂点出现, 但尚未出现DNA片段的大量丢失, 因此该方法检测不出早期凋亡细胞。后者灵敏性及特异性均较高, 两者结合可以较好地反映出细胞凋亡的真实情况。应用这两种检测方法, 我们观察到培养垂体腺瘤细胞在ACh、碳酰胆碱等因素处理后, 未检测到明显的凋亡指征。提示ACh仅对培养人垂体腺瘤细胞的增殖代谢和DNA合成有抑制作用, 但不诱导其凋亡。
我们的实验结果表明, ACh可以明显抑制体外培养人垂体腺瘤细胞的增殖代谢, 这种作用是普遍性的, 对无功能瘤细胞、催乳素瘤细胞和生长激素瘤细胞均有明显的抑制作用。深入研究这种调控作用的机制, 将有助于了解垂体瘤的发生、侵袭机制和认识垂体的旁分泌通讯网络, 也将有可能对垂体瘤的治疗产生推动作用。
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