食管癌贲门癌组织中多药耐药基因表达的初步研究
山西医药杂志 1999年第2期第28卷 临床研究
作者：张敏 丛娟 李建民 马炎炎 王春利 张少云
单位：山西省肿瘤医院(030013) 张敏 丛娟 李建民 马炎炎 王春利 张少云
化疗是食管癌、贲门癌综合治疗中的重要组成部分。但是，食管癌和贲门癌一般对化疗药物相对不敏感，化疗只起一定的辅助作用，单纯化疗很难达到完全缓解， 更难根治〔1，2〕。是否是由于食管癌贲门癌的肿瘤细胞具有耐药性?因为肿瘤细胞产生耐药性是肿瘤化疗难以取得预期效果的重要因素之一〔3〕。 因此，对食管癌贲门癌的耐药性进行检测对指导临床判断治疗效果有重要的临床价值。本文对未行化疗的食管癌和贲门癌新鲜组织中多药耐药基因(MDR-1)的表达情况及其与临床病理指标的关系进行了研究， 现将结果报告如下。
1 资料与方法
1.1 检测对象42例食管鳞癌， 58例贲门腺癌为我院胸外科1997年5月－1998年5月手术切除的新鲜标本，术前均未行其他治疗。其中男性68例，女性32例，年龄45岁～74岁，平均64.2岁。食管癌病例按1987年UICCTNM标准分期，贲门癌按1985年UICC胃癌TNM标准分期。
1.2 方法
1.2.1 仪器：USAMJResearch公司产PTC－150型扩增仪， TGL高速离心机、IF紫外线透射观察分析仪，(上海康化生物仪器厂)， RT－PCR检测试剂盒购自北京天象人生物工程公司。
1.2.2 总RNA的提取：取3mg癌组织匀浆加100μl生理盐水悬浮，取25μl加100μl裂解液A，充分振荡，再加入裂解液B100μl与50μl氯仿，充分混匀。15000r/min离心10min，小心吸取上清50μl，加60μl预冷－20℃的异丙醇混合10s，15000r/min，5min，弃上清，80%乙醇离心洗涤一次弃上清，室温干燥。
1.2.3 扩增反应：向处理好的样本管中加入20μlMDRRTmix和1μlEmix混合均匀，离心数秒，加两滴石腊油，42℃保温30min，按94℃45s， 55℃45s，72℃45s，扩增35个循环。
1.2.4 电泳鉴定：5ml50×TAE稀释至250ml，0.4g琼脂糖加20mll×TAE熔化制胶， 取10μl扩增产物加于2%的琼脂糖凝胶电泳。
1.2.5 结果记录及判断：紫外线透射分析仪下观察， 阳性结果为同时出现两条带，分别为548bp(内标带)和167bp(MDR-1基因扩增带)。 拍照后，将底片置密扫描仪下分析，以两条带的积分光密度比值反映MDR-1基因的相对表达，即MDR-1／内标＜0.1时为阴性。
1.2.6 计算全部MDR1基因的阳性表达率：以临床TNM指标分组记录各组表达情况，比较各组组内表达的差异。
1.2.7 统计学处理：采用χ2检验。
2 结果
2.1 由表1可以看出，食管鳞癌组织中MDR-1基因阳性表达为35.71%， 贲门腺癌组织中MDR-1基因阳性表达为31.03%，均表现为内在性耐药。
表1 MDR-1基因在食管癌、贲门癌中的表达
组别 例数 MDR-1 阳性例数% 食管癌 42 15 35.71 贲门癌 58 18 31.032.2 由表2可以看出，食管鳞癌原发肿瘤(T)不同分级间、区域淋巴结(N)不同分级间和食管癌TNM分期间MDR-1基因的阳性表达率，经统计学处理，各组间的差异无显著性意义(χ2值分别为0.3906，0.079，0.32，P值均大于0.05)。
表2 MDR-1基因在食管癌中的表达
临床病理指标 例数 MDR-1 阳性例数% 肿瘤大小T1 4 1 25 T2 16 6 37.5 T3 20 7 35 T4 2 1 50 淋巴结转移N0 8 3 37.5 N1 34 12 35.3 病期Ⅱa 12 4 33.3 Ⅲb 20 8 40 Ⅲ 10 3 302.3 由表3可以看出，贲门腺癌原发肿瘤(T)不同分级间、区域淋巴结(N)不同分级间和贲门癌的TNM病期间MDR-1基因的阳性表达率，经统计学处理，各组间的差异无显著性意义(χ2值分别为4.88，0.672，0.08，P值均大于0.05)。
表3 MDR-1基因在贲门癌中的表达
临床病理指标 例数 MDR-1 阳性例数% 肿瘤大小T2 18 5 27.77 T3 30 10 33.33 T4 10 3 30 淋巴结转移N0 8 2 25 N1 28 10 35.37 N