原发性胆囊癌抑癌基因P53蛋白表达及其意义
肝胆胰外科杂志 1999年第4期第11卷 临床研究
作者：邬剑华 王鲁 蔡端
单位：上海医科大学附属华山医院普外科(200040)
关键词：胆囊癌；抑癌基因；P53蛋白；免疫组织化学
摘 要 目的 探讨抑癌基因P53蛋白在原发性胆囊癌的表达及意义。方法 采用免疫组织化学方法检测了60例原发性胆囊癌抑癌基因P53蛋白的表达。结果 胆囊癌肿瘤细胞P53蛋白的阳性反应率为33.3%(20/60)，慢性胆囊炎及癌旁正常粘阳性反应率均为0，两者比较差异有显著意义(P＜0.005)。结论 P53蛋白的表达与肿瘤的分化程度有一定的关系，低分化胆囊腺癌中P53蛋白阳性表达率明显高于高分化腺癌(P＜0.005)，提示P53基因的表达参与胆囊癌发生发展过程。
肿瘤分子生物学研究发现抑癌基因P53在细胞生长分化过程中起着负性调节因子的作用。本实验采用免疫组织化学方法检测原发性胆囊癌中P53蛋白的表达，旨在探讨P53蛋白在胆囊癌中的表达特征及其临床意义。
1 材料和方法
1.1 一般资料 收集我院自1988年至1996年手术切除胆囊癌标本60例，年龄36至81岁，平均56岁，男23例，女37例，男女比例为1∶1.6。经病理证实均为胆囊腺癌。按1991年WHO病理分类标准，其中高分化的18例，分化中等的28例，分化差的14例。取同期慢性胆囊炎标本37例作为对照组。
1.2 试剂 小鼠抗人P53单克隆抗体(购自DaKo公司产品)，生物素化兔抗小鼠IgG及ABC复合物(购自美国Vecter公司产品)。
1.3 方法 标本经10%福尔马林固定，梯度酒精脱水、二甲苯透明、石蜡包埋、普通切片机作连续切片，厚5μm，分别行HE染色和ABC免疫组化染色，后者主要步骤如下：石蜡切片常规脱蜡到水；0.6% H2O2-甲醇阻断内源性过氧化物酶活性；滴加小鼠抗人P53(工作浓度为1∶100)4℃过夜；滴加生物素化兔抗小鼠IgG(工作浓度1∶100)；最后滴加ABC复合物，上述各步均以PBC溶液洗片三次。DAB溶液显色后，苏木素复染细胞核，脱水树胶封片。
1.4 结果判断 光镜下观察细胞核内出现明显的棕褐色颗粒为P53蛋白阳性细胞。每张切片随机观察10个高倍视野，按肿瘤细胞着色强度及阳性细胞占肿瘤细胞百分率分为三个等级：+(10%～30%)，(30%～60%)，(＞60%)。
2 结果
2.1 胆囊癌的P53蛋白阳性率及分布特征：经ABC免疫组化染色后，60例胆囊腺癌中有P53蛋白表达的20例，其阳性率为33.3%(20/60)，胆囊癌P53蛋白阳性物质主要位于细胞核，呈粗细不等深浅不一的棕色颗粒，仅有1例同时有胞浆阳性着色。其中强阳性()12例，阳性()5例，弱阳性(+)3例，而37例慢性胆囊炎及癌旁胆囊粘膜组织内均无P53蛋白表达，两者比较，差异有显著意义(P＜0.005)。
2.2 P53蛋白阳性反应与胆囊癌分化程度的关系见表1。经ABC免疫组化染色后P53蛋白阳性反应20例的胆囊癌中，P53蛋白表达阳性率随着胆囊癌分化程度的降低而逐渐增高，其中分化差的胆囊癌阳性表达率为71.4%(10/14)，而高分化和中等分化胆囊腺癌阳性表达率分别为22.2%(4/18)和21.3%(6/26)，差异有显著性意义(P＜0.005)。
表1 P53蛋白表达与胆囊癌分化程度
胆囊癌组织类型 例数 P53蛋白(-) P53蛋白(+) 高分化腺癌 18 14 4* 中分化腺癌 28 22 6 低分化腺癌 14 4 10Fisher精确检验，与低分化腺癌比：*P＜0.05
2.3 P53蛋白阳性反应与肿瘤临床病理分期的关系。在本组60例胆囊癌中，按照1987年UICC的胆囊癌TNM分期标准分期，Ⅰ期19例，Ⅱ期15例，Ⅲ期17例，Ⅳ期9例，P53蛋白在各分期胆囊癌中有不同程度的表达，其间差异无显著性意义(P＞0.05)(见表2)。
表2 P53蛋白表达与胆囊癌临床分期的关系
临床分期 例数 P53蛋白(-) P53蛋白(+) Ⅰ期 19 11 7 Ⅱ期 15 11 4 Ⅲ期 17 12 5 Ⅳ期 9 6 42×4表格χ2检验，P＞0.05
3 讨论
P53基因是至今发现与人类肿瘤相关性最高的基因，野生型(Wild Type)P