人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus, HIV）是艾滋病的病原体， HIV的早期诊断具有非常重要的意义，它可早期发现处于抗体窗口期的原发感染者和正确诊断HIV抗体阳性母亲所生婴儿是否确实为HIV感染者，以便及时制订预防和干预措施、治疗对策，阻止传播和防止机会性感染，同时也有利于对HIV的基础和临床研究。目前，用于诊断HIV早期感染的方法主要有细胞培养（病毒分离）、P24抗原检测和核酸检测。细胞培养专一性很强，不会出现假阳性，但其敏感性较差，因为必须有一定数量的感染细胞存在才能培养和分离出病毒来。P24抗原检测易受血清中出现的抗体影响而降低其敏感性，相比之下，核酸检测更为简单、敏感，适合于HIV的早期诊断，因为细胞内RNA在感染HIV后短期内便可复制达到较高水平。为此，我们采用核酸序列扩增对几组可能处于HIV感染早期的高危人群的86份样品进行了检测，并结合抗体检测结果进行分析，现报告如下。
一、材料和方法
1. 研究对象：来自四川、云南、河南和北京的HIV-1抗体阳性母亲所生的婴儿，HIV-1抗体阳性的配偶，HIV-1抗体检测阴性但自述近段时间有过高危行为的人群及发生针刺事故的医务人员。
2. 样品的收集和处理：上述对象用无菌抗凝管静脉采血3－5ml，离心2000r/min20min,分离血浆-70冻存，用作病毒核酸检测和抗体检测。
3. 血清学检测：所有血清样品先用HIV-1酶联免疫吸咐实验（ELISA）初筛试剂初检,如为阳性再用免疫印迹确认实验进行确认（HIV抗体初筛试剂盒和Western blot确认试剂盒均购自荷兰欧嘉隆公司），严格按试剂说明书操作。
4. 核酸序列扩增检测：（HIV-1QT检测试剂盒也购自荷兰欧嘉隆公司）。(1)提取病毒核酸: 取100μl血清样品加入900μl病毒裂解液中,混匀。加入200μl具有不同浓度值用以制作标准曲线的3个内标，再加入50μl二氧化硅，混匀。然后依次用硫氰酸胍，75%的乙纯洗2次，丙酮洗1次，置56℃水浴10min干燥，加入50μl洗脱液，混匀，1000r/min2 min，上清液即为病毒核酸。(2) HIV-RNA扩增: 取5μl核酸样品,10μl引物,混匀,65℃5min,41℃5min,然后加入 5μl带有T7RNA聚合酶启动子的逆转录酶, 41℃恒温水浴中90min。(3)HIV-RNA的检测: 将5μl扩增好的核酸样品与20μl检测液混匀, 同时设立阴性对照，41℃30min后加入300μl缓冲液上机检测。(4)结果判定: 根据3个内标浓度绘制的标准曲线可得到待测样品浓度,以小于其最低检测线(Lowest Detection Limit, LDL)为核酸检测阴性结果。
二、结 果
1. 对HIV-1抗体阳性母亲所生婴儿的检测：检测12例HIV-1抗体阳性母亲所生的婴儿（年龄3－18个月），抗体初筛与确认实验均为阳性，有4例抗体检测和核酸序列扩增均为阳性，8例抗体检测阳性而核酸序列扩增为阴性。随后的抗体追踪检测其抗体于3－9个月后转阴, 证明这8例婴儿首次体内所检测到的抗体确实是其母亲的IgG，而非感染后自身产生的抗体。
2. 对HIV-1阳性配偶的检测：32例HIV-1抗体阳性的配偶样品的检测结果: 15例HIV-1抗体检测和核酸序列扩增均阳性；在抗体检测为阴性的17例中，核酸序列扩增发现5例阳性， 3个月后再次的抗体检测证实这5例病人的血清抗体发生阳转,证明他们的确已感染了HIV。
3. 对高危行为后可凝人群的检测：对来我院性病门诊就诊的40名抗体检测为阴性，但自述其近段时间有过高危行为的人群的核酸序列扩增均为阴性，3个月后的抗体跟踪检测也证实，他们没有发生HIV-1感染。
4. 另对2名从事HIV工作的医务人员，在发生针刺事故后24小时内服用叠氮胸苷（AZT）和双脱氧胞苷ddC，并于2周后进行了核酸序列测定, 结果为阴性，后又在3个月、6个月2次进行了HIV-1抗体检测，结果也为阴性，排除了HIV感染。
三、讨 论
目前，血清抗体检测是诊断是否感染HIV的常规技术。但对某些HIV感染者，单纯用血清学检测并不能达到目的甚至可能得到错误结果，因为个体从感染HIV到抗体产生有一段大约6－8周的“窗口期”，在这段时间检测血清抗体是阴性结果但实际上可能已经感染。又如对于HIV阳性母亲所生的婴儿，由于母亲的IgG抗体可被动的传给胎儿，HIV抗体检测要到第二年甚至更长时间才可用作其是否感染的证据，如早期单纯凭抗体检测就妄下结论，则易得出错误结果。要克服抗体检测的这个不足可借助细胞培养、病毒抗原P24及病毒核酸扩增检测技术。本研究就是用病毒核酸扩增检测技术之一种：核酸序列扩增或称为转录式核酸序列扩增来检测几组可能感染了HIV的高危人群，核酸序列扩增反应的优点是它在反应中既可扩增RNA又可扩增DNA，因此具有很高的敏感性，从我们的实验结果看，它不仅帮助我们正确区分了HIV抗体阳性的婴幼儿是否确实为HIV 感染者，而且还早期诊断了处于HIV抗体窗口期的感染者，对2名发生了针刺事故并及时进行了预防性用药的医务人员检测为阴性结果提示，预防用药可能是事故发生后防止HIV感染的重要手段。但要作出肯定结论尚须观察更多病例。另外NASBA除了用于检测诊断早期HIV-1感染之外，还广泛用于研究HIV的感染过程、随防HIV的疾病进展和药物疗效的评价。但该方法1个明显不足之处在于，其仪器和试剂非常昂贵，难于在基层开展。
摘自中华医学检验杂志，2002,25(5)61-62
北京市自然科学基金资助（基金项目：7982025）
作者单位：100011 北京地坛医院艾滋病临床研究中心(姚均、何忠平、张福杰、徐克沂);
卫生部艾滋病预防与控制中心（邵一鸣）；云南楚雄戒毒所（王永强）