表1 上呼吸消化道鳞状细胞癌的不同表现

传统鳞状细胞癌伴不同等级分化作用

疣状鳞状细胞癌及混合性疣状鳞状细胞癌

肉瘤样（化生性）鳞状细胞癌

基底样鳞状细胞癌

腺鳞状细胞Ca

脉样鳞状细胞Ca及棘状/鳞状细胞Ca

乳头状鳞状细胞Ca

淋巴上皮（鼻咽部型）Ca

　　采用由Batsakis等人；Crissman等人及Thompson等人描述的乳头状鳞状细胞癌组织形态学诊断标准，本研究报告了乳头状鳞状细胞癌的临床病理学特点及与HPV病毒感染及P53蛋白异常相关的研究发现。

材料及方法
病员群体：
　　我们研究了Texas大学M.D.Anderson癌病中心（Houston, TX）及Case Western Reserve医学中心（Cleveland OH）包括大颈部的乳头状鳞状细胞癌病例的病历及H.& E染色切片，从中筛选出38例病案，并做进一步回顾性研究，临床病理学特性研究，包括病员人口统计学肿瘤原发部位，病变扩数及治疗计划。其中14例还提取了切除肿块进行分子学研究分析，25例还提供了为期至少5年（自诊断后）的随访资料（平均为3年），肿瘤组织根据国际抗癌协会分类法进行分期。
分子学研究：
　　将取自乳头状鳞状细胞癌；良性口、喉、鼻窦鼻部鳞状细胞乳头状瘤对照标本；疣状鳞状细胞及传统鳞状细胞癌；及非疣状非乳头状鳞状细胞癌标本进行甲醛固定，石蜡包埋的样本进行病毒原位杂交反应（Digene Tissue Hybridization kit. Digene Diagnostics, Beltsville, MD）。采用针对HPVS 6/11，16/18，31/33/35亚型的HPV PNA生物探针对所有的样本进行病毒检测，同时亦进行E-B病毒杂交反应。若出现检内兰-紫色斑点则显示有阳性杂交反应信号出现。
　　通过多聚酯链反应（PCR），可以商业性合成用以扩增GAPDH的寡核甘酸引子及HPV基因序列（Genosys, The Woodland TX），感应引子被用于放大来自HPVS6.11.16.18.33的LI开放性可读结构的450-bp PCR产物。采用Ting及Manos方法同时对GAPDA及HPV基因序列进行扩增，在每一个PCR分析中均有一个无DNA的对照反应，PCR产物首先采用凝胶电脉技术进行分析（MetaPhor Agarose, FMC, Rockland, ME）,样本可被ethidium溴化物着色并在紫外线不被显示，故DNA可经肉眼被查觉。随后PCR产物经凝胶组织转移至于 右膜上(Hybond N+ Amersham, Arlington Heights IL)，并采用P32-标记的寡核甘酸探针进行杂交反应--探针由5'-终末标记的5` DNA终未端标记系统反应产生（GIBCO-BRL。 Life Technologies, Grand Island NY），三个探针混合物包括等量的HPVS6及11，HPVS16及18，HPVS31，33及35。分别在57℃对HPVS6/11， 59℃对HPVS 16/18及31/33/35进行着强度冲洗之后，采用自放射照相术可以探测出杂交信号。
　　为显示P53蛋白的存在，将4μm厚度的肿瘤及对照样本切 进行脱蜡及抗野生型及突变P53蛋白的PO-7抗体着色反应（Dako Copenhagen Denmark）。采用抗生活素-生物素复合物技术检测出这些免疫组织化学标记物（Vector Laboratories, Burlingame, CA）。被这些抗体着色的细胞的采用百分比方法进行分类：4+：75%-100%着色；3+：50%-74%着色；2+：25%-49%着色；1+：5%-24%着色及±0.5%着色采用Kaplan-Meier统计学方法对资料进行分析。根据肿瘤部位HPV状态，P53状态，病员年龄及性计算出在谈时间点（日）无病状态的可能性。对无病变曲线中的观察的差异性的评估采用Mantel-Haenszel对数法统计所得。采用差方分析法对乳状癌及非乳头状癌病变人群之间的HPV流行作了比较。