proliferation.Shijie HuarenXiaohua Zazhi 2003;11(8):1193-1196
摘要
目的:探讨丁酸钠、穿琥宁体外联合应用对结肠癌细胞的影响.
方法:应用生长曲线、MTT、流式细胞仪、电镜研究丁酸钠、穿琥宁对HCT-8的增生抑制及诱导凋亡作用.
结果:丁酸钠对HCT-8细胞有明显抑制作用，48h后各组抑制率分别为15.7%，20.3 %，33.3% (P
<0.01)，呈现浓度、时间依赖性.电镜下观察可见成熟分化改变及凋亡细胞，流式细胞仪可检测到亚G1峰，细胞周期分析发现其主要阻滞在G1期.穿琥宁与其联合应用，混合组1在24h，48
h凋亡率为23.5%，48.6 %，混合组2在24h，48 h凋亡率为30.8%，54.2 % (P<0.01).
结论:丁酸钠抑制HCT-8细胞增生，并诱导其成熟分化、凋亡.穿琥宁与其合用使凋亡率增加.
布立民,纪欣, 韩英,陈刚, 王志红,孙淑红. 丁酸钠联合穿琥宁对人大肠癌细胞HCT-8 增生的影响.世界华人消化杂志
2003;11(8):1193-1196
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引言大肠癌较常见，随着人民饮食结构的改变，大肠癌的发病率与死亡率逐年上升严重威胁人们的身心健康，平均5a生存率低于40%[1, 2].
积极探讨大肠癌综合治疗的新手段有重要的临床和社会经济意义.晚期转移性或不可切除的结肠癌患者的化疗仍以5-FU为主，但总有效率仍不满意.研究表明，多种肿瘤的发生与细胞凋亡障碍有关[3,4]，诱导肿瘤细胞凋亡可能成为肿瘤治疗中有前景的手段之一.丁酸钠作用于大肠癌细胞株，可抑制其增生，阻滞细胞周期，并诱导细胞凋亡[5-11]，而穿琥宁与其联合应用，使抑制作用明显增强，凋亡率增加，这为大肠癌的治疗及预防提供了新途径.
1 材料和方法
1.1 材料 穿琥宁由哈尔滨制药三厂生产，有效成分为脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐，200mg溶于 溶液5mL中，4
°C室温避光保存.丁酸钠 (n-butyricacid sodium)购自Sigma公司，250mg溶于 溶液20mL中，4
°C室温保存，保存液浓度为0.11mol/L，噻唑兰(MTT)、碘化丙啶(PI)Sigma公司产品.HCT-8为结肠腺癌细胞，由北京药物研究所提供，贴壁培养于100mL/L胎牛血清和青、链霉素的RPMI1640的培养液中，置37°C，50mL/L
CO2饱和湿度的无菌培养箱中培养.
1.2 方法
将对数期生长细胞用胰酶消化成单个分散细胞，分种到每孔含3mL培养液的6孔板中，培养24h后加入穿琥宁溶液和丁酸钠溶液，各组的终浓度分别为:穿琥宁0.4
g/L，1.2g/L，2.4
g/L，丁酸钠1.1，3.3，5.5mol/L，连续培养5d，每天每组取3孔进行细胞计数，每组取平均值绘制生长曲线.根据生长曲线观察结果，分为穿琥宁1组(0.4g/L)、穿琥宁2组(1.2g/L)、穿琥宁3组(2.4g/L)、丁酸钠1组(1.1mol/L)、丁酸钠2组(3.3mol/L)、丁酸钠3组(5.5mol/L)及混合组1(穿琥宁1.2g/L 丁酸钠3.3mol/L)、混合组2(穿琥宁1.2g/L 丁酸钠5.5mol/L)进行细胞毒性试验及流式细胞仪检测.
1.2.1 细胞毒性试验
取对数生长期细胞调整至5×108/L接种到96孔板，使每孔含培养液100mL，细胞数5×104/孔，培养24h后，分别加入上述浓度的丁酸钠及穿琥宁，作用48h后每孔加MTT10mL，继续培养4h后弃上清液，每孔加二甲基亚砜100mL，振荡10min，使各孔结晶充分溶解，30min后采用波长490nm在酶标仪上测定各孔A值，每浓度组取8个复孔，取平均值按下式计算抑制率:抑制率(%)=(对照组A值-实验组A值)/对照组A值×100%.
1.2.2 流式细胞仪分析
取对数期生长细胞以5×108/L，接种于50mL培养瓶中，加等量 溶液为阳性对照组，适应性培养24h后，各实验组分别加入相应浓度的药物，在加药后24、48h终止培养，胰酶消化成单细胞悬液，进行碘化丙啶(PI)染色，流式细胞仪检测，用MmLticycle软件进行DNA含量和细胞周期分析.
1.2.3 透射电镜观察
取正常对照组、丁酸钠3.3mmol组、穿琥宁1.2mg组和混合组1在加药后24h用少量胰酶消化脱壁，25g/L戊二醛固定后，常规脱水染色，制成超薄切片后进行电镜观察.
统计学处理 采用t检验方法，P<0.01，数据分析软件为STATA软件.
2 结果
2.1 生长曲线观察 低浓度穿琥宁
(0.4g/L)对细胞生长无明显抑制作用，1.2g/L穿琥宁对细胞生长有轻度抑制作用，2.4g/L浓度有一定抑制，但细胞仍可生长(图1).丁酸钠各浓度均有抑制作用，1.1mol/L组轻度抑制，3.3mol/L中度抑制，5.5mol/L有明显抑制作用(图2).
图1(PDF)不同浓度穿琥宁的生长抑制曲线.
图2(PDF)不同浓度丁酸钠的生长抑制曲线.
2.2 细胞毒性试验
根据各组PI值进行抑制率的比较，对照组为3%，穿琥宁0.6g/L组为7%，穿琥宁1.2g/L组为13%，穿琥宁2.4g/L组为24
%，丁酸钠1.1mol/L组为15.7%，丁酸钠3.3mol/L组为20.3%，丁酸钠5.
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