免疫学杂志 2000年第3期第16卷 基础免疫学
作者：姚余有张玲玲王晓琴
单位：姚余有（安徽医科大学基础部东南医学科技发展有限公司，安徽合肥230032）；张玲玲（安徽医科大学基础部东南医学科技发展有限公司，安徽合肥230032）；王晓琴（安徽医科大学基础部东南医学科技发展有限公司，安徽合肥230032）
关键词：单克隆抗体；血型定型试剂；杂交瘤细胞
［摘要］目的研究影响抗A杂交瘤细胞抗体分泌的部分因素。方法通过试管法和玻片法检测抗A抗体的效价和亲和力。结果0.25mmol／L、0.5mmol／L丁酸钠和0.01U／ml胰岛素能明显提高抗A抗体的效价和亲和力；HAT重筛选可使部分小体积细胞迅速死亡，抗A抗体的效价和亲和力明显提高。结论丁酸钠、胰岛素和HAT重筛选可提高抗A杂交瘤细胞抗体的分泌。
［中图分类号］R392-33［文献标识码］A
［文章编号］1000-8861（2000）03-0204-02
The study of fact that influence the anti-A antibody of hybridoma
YAO Yu-you，ZHANG Ling-ling，WANG Xiao-qing
（Southeastern Medical Science and Techology Development Co Ltd，Anhui Medical University，Hefei 230032，China）
［A tract］ Objective To study the fact that influenced the anti-A antibody of hybridoma.Methods The titer and affinity of anti-A secreted by hybridoma were tested by tube method and slide method.Results 0.25mmol／L and 0.5mmol／L sodium butyrate could significantly increase the titer and affinity of anti-A that could be promoted by 0.01 U／ml i ulin too.Many smaller ones of the experimental cells died rapidly in the HAT medium，after which the titer and affinity of anti-A rose markedly.Conclusion The sodium butyrate and i ulin can promote the titer and affinity of anti-A secreted by hybridoma，and the surviving clones in HAT medium could secreted more antibody of anti-A.
［Key words］monoclonal antibody；blood grouping reagents；hybridoma
血型定型单克隆抗体试剂已广泛用于临床医学、法医学、考古学等工作中，与某些发达国家相比我国血型定型试剂在效价和亲和力方面仍存在一定差距，有些企业因产品效价和亲和力达不到国家标准而致产量大幅度下降，故研究出提高抗体效价和亲和力的方法将有着深远的意义。
1材料与方法
1.1细胞系抗A-6-1-G11由本校分子生物学研究室提供。
1.2试剂牛胰岛素（40U／ml），上海生物化学试剂厂生产；RPMI1640，美国GIBCO产品；氨甲喋呤（AR级），Fluka公司产品；丁酸钠（AR级）、次黄嘌呤（AR级）、胸腺嘧啶核苷（AR级）均为Sigma公司产品；小牛血清，合肥奶牛厂产品。
1.3仪器CO2培养箱，美国IEVCO产品；倒置显微镜，重庆光学仪器厂产品。
1.4抗A杂交瘤细胞的培养将冻存于液氮中的抗A杂交瘤细胞复苏后，移入盛有10％小牛血清1640培养液中，置37°C，5％CO2培养箱中培养，待细胞长满底壁后传代，第3代细胞生长速度明显加快，此细胞即可作为实验细胞。
1.5丁酸钠对抗A杂交瘤细胞抗体分泌的影响将实验细胞从培养瓶底壁吹下，洗涤2次后，用10％小牛血清1640培养液配成浓度为1×105／ml个细胞的细胞悬液，移入24孔培养板，每孔1ml，然后加入含不同浓度丁酸钠的1640培养液1ml，观察不同浓度丁酸钠对抗体分泌的影响。
1.6胰岛素对抗A杂交瘤细胞抗体分泌的影响细胞培养及实验细胞分组同前，最后向24孔培养板中加入不同浓度胰岛素，观察胰岛素对抗体分泌的影响。
1.7HAT筛选对抗A杂交瘤细胞抗体分泌的影响培养基的配制见文献［1］，用此培养基配制浓度为1×105／ml个细胞的细胞悬液，移入24孔培养板每孔2ml，置37°C，5％CO2培养箱中培养，待培养一定时间后逐渐更换成普通培养基，另设无HAT对照，观察HAT筛选组与无HAT组之间的差别。
1.8抗A抗体效价和亲和力测定见中国生物制品规程二部［2］
1.9数据处理采用student’t检验
2结果
2.1丁酸钠对抗A杂交瘤细胞抗体分泌的影响按表1分组，结果显示0.25mmol／L和0.5mmol／L的丁酸钠组抗体效价和亲和力明显提高，但当丁酸钠浓度为1mmol／L时，杂交瘤细胞生长受到抑制，抗体效价随之明显降低。
表1丁酸钠对抗A杂交瘤细胞抗体分泌的影响
Tab1The effect of sodium butyrate on anti-A antibody secreted by hybridoma
Sodiumbutyrate（mmol／L） Titer Affinity（s）
0 1∶256 6.21±0.13
0.125 1∶256 6.20±0.13
0.25 1∶512 5.24±0.11**
0.5 1∶512 4.52±0.13**
1.0 1∶128 7.00±0.11
1×105 cells per well was incubated with various concentratio of sodium butyrate at 37°C，5％CO2.The titer and affinity was tested when the cell grew fully on the bottom of bottle，n＝10，±s；**P＜0.01，compared with control（sodium buty