关键词：塞来昔布
【摘要】 目的 探讨塞来昔布对大肠癌细胞侵袭能力和转移能力的影响，以及对肿瘤血管生成的影响。方法 用Matrigel体外侵袭实验检测塞来昔布对LoVo细胞体外侵袭能力的影响;建立Lovo细胞裸鼠肝转移模型，检测塞来昔布对LoVo细胞肝转移能力的影响;用CD34免疫组化染色方法检测肝转移瘤的微血管密度（MVD），了解塞来昔布对肿瘤血管生成的影响。结果 塞来昔布能显著降低LoVo细胞的体外侵袭能力。塞来昔布能显著减少裸鼠LoVo细胞肝转移模型的肝转移数量，对照组98.83±10.42，用药组63.4±5.59（P<0.01）。用药组的微血管密度均明显低于对照组（P<0.01）。结论 塞来昔布能明显降低LoVo细胞的体外侵袭能力和在裸鼠体内的肝转移能力，并能抑制转移瘤的血管生成。
关键词 塞来昔布 大肠癌 侵袭 转移 血管生成
The influences of celecoxib on the invasive and metastatic abilities of colorectal cancer cells
Zhao Leiguang，Wan Yuanlian，Zhu Jing.
Department of General Surgery，the First Ho ital of Beijing University，Beijing100034.
【A tract】 Objective To study the influences of celecoxib on the invasive and metastatic abilities of colorecˉtal cancer cells，and the influence on tumor angiogenesis.Methods Matrigel invasion a ay was used to o erve in vitro the influence of celecoxib on the invasive ability of LoVo cells.The liver metastasis model was established in nude mice to illustrate in vivo the effect of celecoxib on the metastatic ability of LoVo cells.Microve el de ity of the metastatic nodules was analyzed by immunohistochemistry in CD34-stained tumor sectio to o erve the influence of celecoxib on tumor angiogenesis.Results In vitro invasive ability of LoVo cells was significantly inhibited by treating with celecoxib.Nude mice of treated group developed fewer liver metastatic nodules than those of control group，63.4±5.59vs98.83±10.42（P<0.01）.MVD of treated group was significantly lower than that of control group（P<0.01）.Conclusion Celecoxib can effectively inhibit invasion in vitro and liver metastasis in nude mice of LoVo cells.Celecoxib treatment effectively inhibit cancer angiogenesis in metastatic nodules.Key words celecoxib colorectal cancer invasion metastasis angiogenesis
大肠癌是消化道常见的恶性肿瘤之一，目前，虽然采取了手术及放、化疗等综合治疗手段，对于此类肿瘤的治疗取得了一定的进步，但对肿瘤的转移和复发，仍然缺乏有效的预防和治疗手段，因而转移和复发始终是此类肿瘤治疗的难点所在和影响患者长期生存的重要因素。
近来研究发现环氧合酶同工酶（Cyclooxygenase-2，COX-2）与肿瘤发生、发展、转移有着密切的关系，从而，其抑制剂非甾体抗炎药（no teoidal anti-inflammatory drugs， AIDs），在肿瘤防治中的作用日益受到关注。本实验采用新一代选择性COX-2抑制剂塞来昔布（celecoxib），研究其对大肠癌细胞系LoVo细胞的侵袭和转移能力的影响以及对转移瘤血管生成的影响。从而探讨其用于预防大肠癌转移的可能性。
1 材料
1.1 细胞 NIH/3T3细胞以及人大肠癌细胞系LoVo均源自ATCC，由我院大肠癌实验室冻存。
1.2 主要试剂与耗材 塞来昔布纯品购自安徽合肥森瑞股份有限公司，D-MEM培养基、胰蛋白酶为Gibco公司产品，胎牛血清产自天津生物制品厂，大鼠抗小鼠CD34单克 隆抗体购自BD公司，生物素标记的兔抗大鼠IgG抗体、链霉菌抗生物素蛋白—过氧化物酶 试剂盒、DAB显色试剂盒购自中山公司，Matrigel TM Matrix购自BD公司，8.0μm聚碳酯膜Tra well为Corning Costar公司产品，其他试剂均为国产分析纯。
1.3 动物 8周大的BALB/cA -nu/nu雄性裸鼠购自中国医学科学院动物中心，委托北京大学实验动物中心饲养。1.4 仪器 德国产Heraeus二氧化碳孵育箱，日本产Olymˉpus IX70倒置相差显微镜、Olympus CK2倒置显微镜，北京半导体设备一厂产月坛牌洁净工作台。
2 方法
2.1Matrigel侵袭实验取传代第2天长势良好的NIH/3T3细胞制备趋化因子，按说明书将Matrigel铺于Tra well板上。取对数生长期的LoVo细胞分为3瓶，培养贴壁后加药，分为对照组，塞来昔布5μmol/L和10μmol/L组（均含5‰DMSO），继续培养48h，用 漂洗3次，用无血清D-MEM制备单细胞悬液，5×10 5 细胞/ml，台蓝兰拒染试验细胞活力大于95%，Tra well培养板上室加入100μl细胞悬液（5×10 4 细胞）并加入无血清D-MEM200μl，Tra well培养板下室加入500μl趋化因子，37℃，5%CO 2 培养24h。擦去Matrigel凝胶和聚碳酯膜上表面的细胞，取出上室