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结肠直肠恶性转化中p16和Ras相关结构域家族蛋白1a的甲基化
来源:中国癌症网     点击数:     更新时间:2007-4-20 21:19:40  
2006年05月26日 Mol Cancer Res 2006;4(5):303–9 60

使用显微解剖法对甲醛固定石蜡包埋样品(FF-PEAT)的甲基化进行精确鉴定目前还存在着一些问题,因为样品体积过小而且DNA都已经遭到了破坏。其他的检测甲基化的方法,例如甲基特异性PCR(M ),要求对纯化的DNA进行亚硫酸氢钠修饰( M),这会导致大量的DNA损失。在载玻片上进行 M可以使DNA在从肿瘤组织中分离出来前就已经进行了原位修饰,这可以省去DNA纯化步骤并可以进行组织定位的基因甲基化分析。科学家们对20份结肠直肠癌FF-PEAT样品都用上述方法进行了测试,并用瘤内腺瘤组分来检测结肠直肠恶性转化过程中基因甲基化情况。去石蜡化组织切片在亚硫酸氢钠溶液中60浸泡8小时后使用苏木精染色,然后进行显微解剖法进行分析。蛋白酶K裂解产物直接用作接下来的PCR的模板。使用载玻片 M可以直接对282 长的序列进行测序。用这种方法对DNA进行修饰,DNA的得率比常规方法高出2.6倍,平均转换率为97%,也未发现有假阳性或者假阴性。M 揭示了结肠直肠癌恶性转化过程中由p16和Ras相关结构域家族蛋白1a甲基化引起的瘤内的不均一性。这种载玻片 M可以应用于多种FF-PEAT的甲基化研究中。它可以对实体瘤进行详细的瘤内分析。这种方法可以大大的改进人们研究致癌作用过程的效果。

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