ed eagle medium Gibco，USA)，小牛血清（Hyclone，USA)。主要生化试剂：将消毒后的医用明胶10g加入注射用水50ml，分别加入ACTD 0.1g及VM-26 0.5mg，搅拌成半流状，制成抗瘤缓释剂。原位细胞凋亡检测试剂盒（Roche，Germany)，ABC免疫组化试剂盒及抗体（北京中山及其代理的Santa Cruz公司）。主要仪器：江湾Ⅰ型脑立体定向仪（第二军医大学生产），磁共振仪（Advantage 1.5 Tesla GE Medical Systems，GE Corporation，USA)。实验动物：二级雄性SD大鼠，体重200～300g，共40只，由北京生物制品检定所繁育场提供，其特征已经鉴定。
1.2 实验方法
1.2.1 C6鼠脑胶质瘤模型的建立［1］ C6鼠胶质瘤细胞于含10%小牛血清的DMEM培养液中单层培养。接种细胞量为1.0×106/(10μl·只)。大鼠经10%水合氯醛（300mg/kg）腹腔注射麻醉后，固定于江湾Ⅰ型脑立体定向仪上，手术暴露颅骨标志，在前囟位置，矢状缝右侧3.0～3.5mm处用牙钻钻孔，孔径1.2mm，用微量注射器垂直穿刺右尾状核，将细胞悬液缓慢注入。
1.2.2 实验动物分组及组织标本采集 颅内实验运动分为4组，每组各10只SD大鼠：（1）对照组：接种野生型C6鼠胶质瘤细胞；（2）空载缓释剂组：接种野生型C6鼠胶质瘤细胞后瘤体多点注射半流状医用明胶；（3）ACTD治疗组：治疗组C6鼠胶质瘤细胞种植后第5天，MRI证实有肿瘤形成时，分别于第6、28天按上述方法麻醉、固定动物；同时将制备好的ACTD抗瘤缓释剂原位多点注入瘤体；（4）VM-26治疗组：治疗组C6鼠胶质瘤细胞种植后第5天，MRI证实有肿瘤形成时，分别于第6天按上述方法麻醉、固定动物；同时将制备好的VM-26抗瘤缓释剂载体原位多点注射入瘤体。接种后28、58天各处死1只，瘤标本做常规HE染色并检测凋亡；其余8只长期观察生存期。
各组实验动物在其自然死亡或人为处死后取出脑组织，将肿瘤标本于10%福尔马林溶液中固定，常规石蜡包埋后冠状切片，行大体标本观察、常规HE染色；另进行PCNA免疫组化染色。另一部分标本用OCT包埋液氮速冻-70℃保存冰冻切片，行原位细胞凋亡的检测。
1.2.3 MRI成像及检测方法［2］ 用GE公司1.5T Signa MR机成像，冠状面和矢状面T1WI平扫及增强扫描。根据动物模型对照组生存期规律，本实验的治疗组和空载组各10只大鼠于种植后5天进行全部检测，了解成瘤情况，以便治疗。大鼠种植后1周随机选择4只动物进行检测。以后连续检测各组大鼠的肿瘤生长变化，具体时间为2周、4周、8周、12周。每次检测，除至少选择3只种植后5天或1周已进行检测的动物连续监测外，其他动物则每次选择1～2只轮换进行检测，了解动物成瘤率。
肿瘤体积计算：在实验设计要求的时间点，根据强化影像在冠状扫描最大肿瘤平面测量肿瘤最大长径（L）及宽径（W），在矢状扫描最大肿瘤平面测量高径（H），代入公式：V=（4/3×π× L×Ｗ×Ｈ)×1/8。
1.2.4 组织标本的常规HE染色及细胞凋亡的检测 详见参考文献［1～3］，方法从略。
2 结果
2.1 大鼠一般情况与生存期观察 对照组及空载组：接种C6细胞1周后，大鼠觅食饮水活动明显减少，体重下降，继而出现进行性左侧偏瘫，并均于2～3周内死亡。8只大鼠平均生存期为（19.3±4.9)天。
2.2 治疗组 最初2～3周内大鼠一般情况类似对照组，处于濒死状态。ACTD组10只大鼠中3只分别于接种第16、21、37天死亡；另6只未死亡的大鼠自第4周起觅食饮水活动逐渐恢复正常，体重增加，其中2只分别于接种后第28、58天处死，3只于第200天处死行病理学检查。VM-26治疗组10只大鼠中5只分别于接种后第16、18、22、36、41天死亡；另5只未死亡的大鼠自第4周起觅食饮水活动逐渐恢复正常，体重增加，其中2只分别于接种后第28、58天处死，3只第200天处死行病理学检查。
2.3 MRI影像学及相应组织病理学变化 对4组大鼠定期检查MRI，并于检查后随机处死，观察相应病理变化。
2.3.1 对照组 接种C6细胞1周后瘤区表现为淡长T1长T2信号，轻度均匀或不均匀强化，中线结构轻度移位，病灶体积分别为155、150、186、172mm3。2周后瘤灶为长T1长T2信号，均匀强化或环状强化，中线结构明显移位，其中3只脑室扩大，瘤灶体积为410、740、546、630、590mm3。病理检查可见C6细胞生长活跃，瘤内有囊变、坏死，侧室脉络丛、室管膜下及蛛网膜下腔可见少量肿瘤细胞。空载组结果与对照组相似。
2.3.2 ACTD治疗组 接种后1周及2周时观察的结果同对照组。接种后4周及8周检查发现原强化瘤灶逐渐缩小，中线轻度左移，脑室扩大。接种12周及28周时复查，瘤灶消失，中线结构无移位。第200天病理检查脑实质内均未见肿瘤细胞，侧室脉络丛，室管膜下及蛛网膜下腔可见少量非增殖性C6细胞（
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