CIII 043
程序降温冷冻保存自体造血干细胞移植治疗恶性血液病
杨同华 沈晓梅 史克倩 赵仁彬 宋建新 王云娟 赖 洵 杨艳梅 陆 洁 崔 黎
650032 云南省第一人民医院血液科
目的：探讨程序降温冷冻保存对造血干细胞活性的影响。方法：临床观察比较4℃保存和深低温保存两组自体造血干细胞移植患者的造血恢复时间，同时采用台盼蓝拒染法与流式细胞仪A exin-V/PI标记法检测两组造血干细胞的活性。结果：深低温保存组移植后血小板上升时间较4℃保存组缓慢(但P＞0.05)，4℃保存对造血干细胞活性影响不大，深低温保存可引起造血干细胞发生大量凋亡和死亡，导致存活率明显降低。采用流式细胞仪A exin-V/PI标记凋亡测定法检测造血干细胞活性的敏感性明显优于传统的台盼蓝拒染法。结论：目前临床上应用的造血干细胞冷冻保护剂仍有较大缺陷，需开发具有抗凋亡作用的新型冷冻保护剂。造血干细胞活性检测选用流式细胞仪凋亡测定法较为可靠。
CIII 044
三丁酸甘油酯诱导白血病细胞增殖抑制、分化、凋亡
及其机理的研究
殷 红 陈子兴 岑建农 王 玮 傅建新 姚 利
215006 苏州大学附属第一医院、江苏省血液研究所
目的：探讨三丁酸甘油酯(Tributyrin，TB)对人急性白血病细胞株 4、K562、SHI-1的诱导分化和/或凋亡作用及其与p21WAF1/CIP1、组蛋白乙酰化之间的关系。方法：利用台盼蓝拒染法、细胞形态学观察， T还原率，联苯胺染色法，细胞表面抗原CD11b、CD71表达，流式细胞仪测定A exinV 结合力和DNA含量，DNA凝胶电泳等方法观察TB对白血病细胞K562、 4、SHI-1(该细胞株由我所陈苏宁博士建自一例对多种化疗药物耐药的急性单核细胞白血病患者)的增殖抑制、诱导分化及凋亡作用。通过Western blotting方法检测组蛋白H3乙酰化水平的改变。用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定TB作用于白血病细胞后，细胞周期依赖性蛋白激酶抑制物(CDKI)p21WAF1/CIP1表达量的改变。结果：①TB可以抑制K562、 4、SHI-1细胞的增殖及活力，呈剂量-时间依赖效应。TB 作用后16小时K562、 4、SHI-1细胞阻滞于G1或/和G2期，并伴分布于S期细胞明显下降，因药物浓度及细胞株的不同而有所差异。②K562、 4、SHI-1细胞分别经TB1.0mM、1.0mM、0.5mM作用48小时后，出现典型的凋亡形态学改变，并可见典型的DNA梯带。TB处理后K562、 4、SHI-1 细胞AnexinⅤ结合力明显上升，提示凋亡细胞增多。③TB 0.1mM／ATRA0.05uM 联合作用于 4细胞72小时后细胞形态较为成熟，ATRA 0.05uM或TB0.1mM作用组细胞形态无明显变化；不同药物作用于 4细胞48小时后，TB0.1mM 组 T还原率较对照组无明显改变，ATRA 0.05uM组 T还原率有所升高，ATRA 0.05uM／TB 0.1mM联用组较单用ATRA 组， T阳性率显著上升，经检验两组差别有统计学意义(p<0.01)。TB 0.1mM作用于SHI-1细胞72小时细胞出现部分分化；TB 0.1mM作用于SHI-1细胞48小时， T还原率较对照组明显上升，经检验p<0.01；分化过程中SHI-1细胞表面CD11b表达上调。TB 0.2mM单用及联合ATRA 1.0uM作用于K562细胞72小时后，细胞形态学、联苯胺染色法、细胞表面CD71检测均未提示细胞出现分化。④TB处理K562、 4、SHI-1细胞16小时后经Western blotting方法检测乙酰化组蛋白表达水平较对照组升高。⑤TB处理16小时后K562、 4、SHI-1细胞p21WAF1/CIP1表达均较对照组明显上调，并具有剂量-时间依赖性。结论：①TB能抑制K562、 4、SHI-1细胞增殖并影响细胞活力；阻滞细胞周期进程于G1和/或G2期。②TB诱导K562、 4、SHI-1细胞凋亡。TB联合ATRA能诱导 4细胞分化，且两者间有协同作用。单用TB可部分诱导SHI-1细胞分化。单用TB及联合ATRA对K562细胞未见明显诱导分化作用。③TB抑制白血病细胞增殖，诱导分化和/或凋亡作用与TB上调p21WAF1表达及引起组蛋白高乙酰化有关。