提要 本文采用3H-TdR和3H-UR掺入S180小鼠肉瘤细胞DNA和RNA的方法,观察了芦笋提取物对癌细胞DNA和RNA生物合成的影响。发现芦笋尖提取液、芦笋茎提取液及芦笋尖乙醇提取液均对癌细胞DNA和RNA生物合成有显著的抑制作用,且抑制作用随着药物浓度的升高而增强。
根据文献资料及我们前段工作已证明芦笋提取物对S180小鼠肉瘤有明显的抑制作用。本文观察了芦笋提取物对S180小鼠肉瘤细胞DNA和RNA生物合成的影响。
1 材料与方法
1.1 动物:(1)瘤鼠:S180腹水型肉瘤小鼠引自中科院上海药物所。(2)正常小鼠:昆明种,雄性,体重18-22g,本院动物科提供。
1.2 试剂:
(1)芦笋尖提取液:含生药1.7g/ml,用NaHCO3调pH至7.2。
(2)芦笋茎提取液:含生药1.9g/ml,用NaHCO3调pH至7.2。
(3)芦笋尖乙醇提取液:含生药2.34g/ml,用NaHCO3调pH至7.2。
(4)3H-TdR和3H-UR:中科院原子能研究所提供,浓度为1mci/ml,用前以生理盐水稀释至10μci/ml。
(5)RPMI1840培养基:日本产,用前加20%小牛血清,100μ/ml青霉素,100μg/ml链霉素,5.6% NaHCO3调pH至7.2~7.4。
(6)闪烁液: O0.4%和POPOP0.05%的二甲苯溶液。
(7)49型玻璃纤维滤膜,上海红光造纸厂出品。
1.3 仪器:FJ-353型双道液体闪烁计数仪:西安262厂产。
1.4 方法:取接种后7天的S180肉瘤小鼠腹水(乳白色),台盼蓝染色镜检,活瘤细胞数大于98%,用RPMI1840培养液洗一次并制备成106瘤细胞/ml悬液。设对照组和用药组。各用药组分别加入不同浓度的各种提取液100μl,对照组加入生理盐水100μl,各组均设三管。所有各管均加入100μl(1uci)3H-TdR和3H-UR,充分混匀,置37℃孵育4h后,立即置冰浴中终止反应。随即用抽滤法将细胞转移至玻璃纤维滤膜上,依次用生理盐水,蒸馏水洗涤细胞,5%三氯醋酸固定,无水乙醇脱水、脱色。取下滤膜,80℃烘干,将干滤膜放入闪烁瓶内。每瓶加入6ml闪烁液,用液体闪烁计数仪测量滤膜放射性,计数1min。结果以[(对照组cpm均值-用药组cmp均值)/对照组cmp均值]×100%表示掺入抑制率。
2 结果
(见附表)
由附表可见,芦笋尖提取液、芦笋茎提取液及芦笋尖乙醇提取液均有随药物剂量增加而3H-TdR和3H-UR掺入肿瘤细胞DNA的RNA的抑制率递增的趋势存在,相关系数γ分别为0.988、0.949、0.909和0.968、0.938、0.991。
3 讨论
本文应用3H-TdR和3H-UR掺入DNA和RNA的方法,观察芦笋提取物对肿瘤细胞核酸生物合成速率的影响较之观察核酸含量变化更为灵敏,是常用的抗肿瘤药物筛选的方法之一。本文在预试的基础上,设置不同浓度的药液,以使其抑制率在50%左右,选择药物与细胞悬液共同孵育4h,使药物的抑制效果更为明显,这也与文献报道基本一致。细胞中核苷掺入核酸是通过核酸的物质的原发作用点可能是(1)抑制核苷通过细胞膜,干扰核苷正常转运;(2)抑制核苷经激酶转化为核苷酸和(或)抑制核苷酸聚合成核酸。对芦笋提取液作用于哪一环节,有待进一步探讨。
附表 芦笋提取物对3H-TdR和3H-UR掺入肉瘤细胞DNA和RNA的影响
组 别 剂量 3H-DNA 3H-RNA
(mg/ml) cpm/106细胞均值 抑制率(%) cpm/106细胞均值 抑制率(%)
生理盐水(1) 100µl 120234.00 — 105175.00 —
芦笋尖提取液(2) 141.67 26795.33 77.71 31863.00 69.71
70.83 84896.67 29.39 65780.50 37.48
35.42 98494.33 18.08 69067.00 34.33
芦笋茎提取液(3) 158.33 39757.50 66.93 18785.50 82.14
79.17 51520.50 57.15 30547.67 70.96
39.58 95332.67 20.71 84217.00 19.93
芦笋尖乙醇提取液(4) 195.00 9310.50 92.26 3516.50 96.66
97.50 16140.33 86.58 17450.67 83.41
48.75 76229.33 36.60 39589.67 62.36
——《蚌埠医学院学报》1991,16(21),116-118
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