蚌埠医学院分子生物学研究室 关钧 赵学海 夏俊 段巧玲 秦秋月

提要 本文应用125J-cGMP放射免疫分析法，检测了灌喂芦笋尖提取液、芦笋尖乙醇提取液及生理盐水的S180肉瘤小鼠血浆cGMP含量，结果分别为15.38±3.77pmol/ml，19.55±6.66pmol/ml和26.39±5.01pmol/ml，经统计学处理（t检验），芦笋尖提取液及芦笋尖乙醇提取液均能显著降低荷瘤小鼠血浆的cGMP水平。

关键词 芦笋 环鸟苷酸 放射免疫分析

我们已观察到芦笋提取物能显著抑制S180小鼠肉瘤生长及瘤细胞核酸的生物合成。对其机制曾有不少假设和探讨，根据我们的研究，认为芦笋提取物的抗瘤作用很可能是通过调节环核苷酸代谢进而调控细胞的增殖和分裂。为此本文观察了其对荷S180肉瘤小鼠血浆环鸟苷酸（cGMP）水平的影响。

1 材料和方法

1．1 动物：（1）正常小鼠：昆明种，雄性，体重20-22g，由本院动物科提供。（2）瘤鼠：S180腹水型肉瘤小鼠，引自中科院上海药物所。

1．2 试剂：（1）芦笋尖提取液：含生药1.79g/ml。（2）芦笋尖乙醇提取液：含生药1.79g/ml。（3）125I-cGMP放免药盒；由上海中医学院同位素室提供。

1．3 仪器：γ免疫分析仪，西安二六二厂产。

1．4 方法：在无菌条件下，取接种后7天的S180瘤鼠腹水（乳白色），台盼蓝染色镜检，活瘤细胞数大于98%，生理盐水1:3稀释，于正常小鼠右前肢腋窝皮下注射0.2ml瘤细胞悬液（约含2×106细胞），随机分为3组，每组10只，于接种后次日分别灌喂芦笋尖提取液，芦笋尖乙醇提取液和生理盐水，0.5ml/只，隔日一次，共4次。于末次灌喂后次日断头取血，EDTA抗凝。取0.1ml血浆，加2ml无水乙醇，摇匀。静置5min后离心（3500r/min，15min）。收集上清液。沉淀再用1ml75%乙醇振摇提取，静置5min后，同上离心。合并上清液，于65℃烘干，—30℃保存。测前加1ml50mmolpH4.75醋酸缓冲液（内含4mnolEDTA）溶解，取 0.1ml测量cGMP含量。具体操作参照刘景生方法和cGMP放免药盒使用说明书。

2 结果

经统计学处理，芦笋尖提取液组及芦笋尖乙醇提取液组小鼠血浆cGMP水平明显低于对照组，而前两组之间无显著差异，其结果（见附表）。

附表 芦笋提取物对荷S180肉瘤小鼠血浆cGMP水平的影响

组 别 例数 cGMP（pmol/m）

始/末 X±SD

生理盐水 10/10 26.39±5.01

芦笋尖提取液 10/8 16.38±3.77•

芦笋尖乙醇提取液 10/10 19.65±6.66• #8226;△

•与生理盐水组比较（t检验）P<0.01

• #8226;与生理盐水组比较（t检验）0.02

△与芦笋尖提取液0.20

3 讨论

环腺苷酸（cGMP）和环鸟苷酸（cGMP）是广泛参与机体内各种物质代谢过程的调控。一般认为，细胞内cGMP的升高，能促进细胞的分裂和增殖，抑制分化。Murad测定了各种生长速度的大量肝癌细胞中环核苷酸含量，发现cAMP虽略高于正常组织但与增殖速率无关，而cGMP却显著高于正常肝细胞且与瘤细胞增殖速率呈正相关。许多中药的抗肿瘤作用正是通过调节环核苷酸代谢来实现的。本文研究发现芦笋尖提取液及芦笋尖乙醇提取液均能显著降低荷瘤小鼠血浆cGMP生成所致，此外，芦笋提取物对cGMP水平，这可能是其抑制S180肉瘤生长的重要原因之一。芦笋提取物之所以能降低cGMP水平，可能是其抑制鸟苷酸环化酶活性，减少cGMP水平的影响还可能是其抑制肿瘤细胞核酸代谢的重要原因。当芦笋提取物抑制鸟苷酸环化酶后，细胞内游离GTP含量相对增多。GTP是核苷酸生物合成途径中的限速酶即催化5-磷酸核糖胺合成的酰胺转移酶的反馈抑制剂，因此抑制了核酸的生物合成。此外，在细胞膜内侧，GTP还能与G蛋白结合，使之活化，活化的G蛋白可激活腺苷酸环化酶，促进cAMP的生成，cAMP升高则抑制癌细胞的生长和增殖。根据兔网织红细胞合成珠蛋白的研究，推测在真核细胞中存在一种依赖cAMP的蛋白激酶。当cAMP与其两个调节亚基结合后，两个催化亚基发挥作用，使无活性的蛋白质生物合成的起始因子-2激酶磷酸化为有活性的起始因子-2激酶。继而使起始因子-2磷酸化而失活，从而抑制蛋白质的生物合成。芦笋提取物对cGMP水平的影响，还可能是其调节免疫功能的重要机制，故我们认为芦笋既有抑制肿瘤细胞生长、增殖的作用又可能提高机体的免疫功能，增强机体防御癌细胞的能力。

——《蚌埠医学院学报》1991，16（2），-118-20

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